穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選
服務(wù)簡介
在基因功能的研究中，將目的基因有效導(dǎo)入靶細(xì)胞，是功能研究的前提條件之一。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求可以選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染/感染和穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建。
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染/感染的特點(diǎn):外源DNA不整合到宿主的染色體中，一個(gè)宿主細(xì)胞中可以存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生短時(shí)間內(nèi)的高水平的表達(dá)(只能持續(xù)幾天);外源基因的表達(dá)水平不存在整合位點(diǎn)的問題，不會(huì)受到周圍染色體元件的影響;瞬時(shí)轉(zhuǎn)染所需的人力和時(shí)間穩(wěn)轉(zhuǎn)少，但DNA攝入效率和表達(dá)水平在不同實(shí)驗(yàn)中差異較大，因此表達(dá)不長久也不穩(wěn)定。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的特點(diǎn):經(jīng)合適的藥物濃度進(jìn)行藥物篩選后，可得到外源DNA整合到宿主染色體的細(xì)胞，這些細(xì)胞可以長時(shí)間表達(dá)外源目的基因，穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株彌補(bǔ)了瞬時(shí)感染(或轉(zhuǎn)染)實(shí)驗(yàn)中外源基因表達(dá)時(shí)間短的缺陷，便于長期觀察。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的篩選需根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物，常用的抗性篩選有嘌呤霉素( puromycin）、潮霉素(hygromycin)、新霉素( neomycin)、滅稻瘟素( Blasticidin)等。若實(shí)驗(yàn)需求構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，我們建議通過慢病毒感染細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選的方法，此方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染可以更加有效的將外源基因整合入基因組，且整合位點(diǎn)處于轉(zhuǎn)錄相對活躍的區(qū)域，從而獲得更加高效表達(dá)外源基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞。
應(yīng)用
如要觀察外源基因表達(dá)后較短時(shí)間內(nèi)就能檢測的細(xì)胞功能，可使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染/感染。即在轉(zhuǎn)染后24至96小時(shí)內(nèi)收獲細(xì)胞;如需要長期觀察外源基因表達(dá)的作用，進(jìn)行長期藥理學(xué)研究、基因治療研究、遺傳調(diào)控機(jī)制硏究或需要進(jìn)行大規(guī)模蛋白合成則需要構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株。 |
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