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公 司: 湖北新德晟材料科技有限公司 
發(fā)布時(shí)間:2022年02月09日
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公 司:湖北新德晟材料科技有限公司

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詳細(xì)說明

    環(huán)己胺丙磺酸CAPS是一種常用的生化原料,可以用作助焊劑、干燥劑、涂料中水性異氰酸酯的固化劑,在生化行業(yè),通常作為生物緩沖劑。根據(jù)其純度和雜質(zhì)含量的不同,應(yīng)用的行業(yè)也不相同。
從分子結(jié)構(gòu)上看,CAPS是一種環(huán)己烷N-取代的氨基磺酸,分子量221.32,具有兩性,是一種非常好的生物緩沖劑,pH緩沖范圍9.7-11.1,通常被用作WB實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)PVDF轉(zhuǎn)膜或硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)膜的緩沖液,
WB即western blot 蛋白質(zhì)免疫印記實(shí)驗(yàn),原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物樣品進(jìn)行著色,通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)如下:
CAPS試劑
1.SDS-PAGE電泳:與核酸雜交方法類似,只不過被檢測的是蛋白質(zhì),探針是抗體,顯色用標(biāo)記的二抗。一般來說低分子量蛋白用Tri-Glycerine或者Tris-Tricine緩沖體系,高分子量蛋白則用CAPS緩沖系統(tǒng)更好。緩沖液中的甘氨酸會影響測序,所以現(xiàn)在測序用的轉(zhuǎn)膜緩沖液是10mM/1CAPS10%甲醇。CAPS電印記緩沖液中的甲醇濃度范圍是0~20%,一般甲醇濃度高的緩沖液對低分子量蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移效果好,而甲醇濃度低甚至不含甲醇的緩沖液則有利于高分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。
2.PVDF膜處理時(shí)先放入甲醇浸泡幾秒鐘,再放入CAPS電印記緩沖液,后續(xù)操作須防止膜干涸,如果PVDF膜變干,需要重復(fù)前面步驟。電泳凝膠也需要在CAPS緩沖液中浸泡5-10分鐘,有些強(qiáng)堿性蛋白可不用此步驟。
3.轉(zhuǎn)印條件通常是50V恒壓、100-170mA電流強(qiáng)度,室溫下進(jìn)行電印記轉(zhuǎn)移,凝膠和PVDF膜之間的氣泡務(wù)必除盡,分子量較高的蛋白注意延長轉(zhuǎn)移時(shí)間。
4.PVDF膜染色前需取出用去離子水稍微漂洗,用甲醇浸泡,然后用0.1%考馬斯亮藍(lán)染色30-50秒,50%甲醇脫色,去離子水洗滌并晾干即可。
以上介紹了蛋白質(zhì)印記實(shí)驗(yàn)需要注意的一些事項(xiàng),除實(shí)驗(yàn)本身外,德晟科技提醒您,為了安全和健康,請穿好實(shí)驗(yàn)服并帶一次性手套操作,CAPS電印記緩沖液建議選德晟生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)環(huán)己胺丙磺酸配置。


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