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上海同科生物科技有限公司
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| TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR） |
產(chǎn)品名稱：TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR）
英文名稱：TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR）
產(chǎn)品描述：TonkBio RT Reagent Kit是專門用于兩步法RT-PCR的*一步，含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的全部試劑。具有較強(qiáng)的延伸能力的ToneScript M-MLV能夠在短時(shí)間內(nèi)高效的合成用于qPCR的cDNA。操作簡(jiǎn)單，適合進(jìn)行高通量分析�？梢耘浜蟂YBR Green法和Taqman探針法做下一步基因表達(dá)分析。
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品規(guī)格 價(jià)格
TB30003A 100 rxns  ￥2700
TB30003B 200 rxns  ￥4050
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1、可以快速、高效合成qPCR用的cDNA，是兩步法反轉(zhuǎn)錄的優(yōu)選試劑。
2、提供了兩種反轉(zhuǎn)錄引物，OligodT primer和Random primer，可根據(jù)具體反應(yīng)情況使用。反轉(zhuǎn)錄時(shí)可以使用OligodT primer或Randomprimer，也可以兩種引物同時(shí)使用。
3、反應(yīng)僅需15分鐘。
4、與qPCR試劑兼容性高。
常見問題解析：
1、 沒有RT-PCR產(chǎn)物或產(chǎn)量低
◆RNA模板降解。RNA的純度和完整對(duì)于反轉(zhuǎn)錄得到全長(zhǎng)cDNA是非常重要的。提取
的RNA應(yīng)進(jìn)行電泳檢測(cè)以確定其是否降解。同時(shí)RNA要避免反復(fù)凍融。
◆RNA模板純度低。提取RNA的過程中，可能殘留一些鹽離子、試劑，如EDTA、酚、
胍鹽、磷酸鹽、多胺等抑制接下來的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。建議用75%乙醇（DEPC水配制）仔細(xì)清洗RNA沉淀。
◆引物不合適。選擇合適的引物，當(dāng) RNA是細(xì)菌RNA或者是沒有polyA尾的RNA要選擇隨機(jī)引物或者特異引物。
◆目的基因含有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或高GC含量。建議選擇隨機(jī)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將反轉(zhuǎn)錄溫度提高至55℃。
2、RNA 中混有基因組 DNA
◆為避免基因組DNA直接擴(kuò)增造成結(jié)果不準(zhǔn)確，①可以在反轉(zhuǎn)錄之前對(duì)RNA進(jìn)行Dnase I 的消化，②引物設(shè)計(jì)時(shí)避免基因組擴(kuò)增，跨較長(zhǎng)內(nèi)含子設(shè)計(jì)上下游引物。
3、陰性對(duì)照中有RT-PCR產(chǎn)物
◆陰性對(duì)照中有RT-PCR產(chǎn)物也表明有DNA的污染。在反轉(zhuǎn)錄之前可以對(duì) RNA 進(jìn)行 DNaseI的消化。 |
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