蛋白純化系統(tǒng)的目的是將目標蛋白質(zhì)從細胞裂解液的全部組分中分離出來,同時仍保留蛋白的生物學活性及化學完整性。蛋白質(zhì)的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務(wù),需根據(jù)蛋白的特性選擇合適的純化方法來提高獲得的蛋白制品的純度。
蛋白純化系統(tǒng)的原理為:不同蛋白質(zhì)的氨基酸序列及空間結(jié)構(gòu)不同,導(dǎo)致其在物理、化學、生物學等性質(zhì)上存在差異,利用待分離蛋白質(zhì)與其它蛋白質(zhì)性質(zhì)上的差異,即可以設(shè)計出一套合理的蛋白純化系統(tǒng)方案。
蛋白純化系統(tǒng)大致分為粗分離階段和精細純化階段兩個階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如RNA、DNA等分開,常用的方法為硫酸銨沉淀法。精細純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來,常用的方法有:凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、親和層析等。 |