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廣州競(jìng)遠(yuǎn)生物科技有限公司
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| 細(xì)胞水平實(shí)驗(yàn)（4） |
細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)
服務(wù)簡(jiǎn)介
細(xì)胞克隆形成率即細(xì)胞接種存活率，表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞成活并形成克隆的數(shù)量。貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖和形成克隆，而形成克隆的細(xì)胞必為貼壁和有增殖活力的細(xì)胞�？寺⌒纬陕史从臣�(xì)胞群體依賴性和增殖能力兩個(gè)重要性狀。
應(yīng)用
如要觀察外源基因表達(dá)后較短時(shí)間內(nèi)就能檢測(cè)的細(xì)胞功能，可使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染/感染。即在轉(zhuǎn)染后24至96小時(shí)內(nèi)收獲細(xì)胞;如需要長(zhǎng)期觀察外源基因表達(dá)的作用，進(jìn)行長(zhǎng)期藥理學(xué)研究、基因治療研究、遺傳調(diào)控機(jī)制研究或需要進(jìn)行大規(guī)模蛋白合成則需要構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株
實(shí)驗(yàn)流程
1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各組細(xì)胞，分別用0.25％胰蛋白酶消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞，并把細(xì)胞懸浮在10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中備用。
2.將細(xì)胞懸液作梯度倍數(shù)稀釋，每組細(xì)胞分別別以每50、100、200個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種含10mL37C預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使細(xì)胞分散均勻。置37C5％C02及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3周。
3.經(jīng)常觀察，當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí)，終止培養(yǎng)。棄去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4％6多聚甲醛固定細(xì)胞5mL固定15分鐘。然后去固定液，加適量 GIMSA應(yīng)用染色液染10～30分鐘，然后用流水緩慢洗去染色液，空氣干燥。
4.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的透明膠片，用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆，或在顯徴鏡(低倍鏡)計(jì)數(shù)大于10個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù)。*后計(jì)算克隆形成率�？寺⌒纬陕�=(克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×100％
細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)
服務(wù)簡(jiǎn)介
細(xì)胞黏附性是維持組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的基本條件，也是細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和發(fā)揮功能的調(diào)節(jié)因素，并且對(duì)細(xì)胞的增殖、分化有重要影響。通�？煞譃閮深�，即細(xì)胞與細(xì)胞黏附和細(xì)胞與基質(zhì)黏附。機(jī)體內(nèi)許多細(xì)胞，如上皮細(xì)胞，需要牢固地定在某處發(fā)揮功能;另一些細(xì)胞，如白細(xì)胞，活躍運(yùn)動(dòng)，就需要不斷調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附。細(xì)胞黏附性的改變?cè)谀[瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中也發(fā)揮著重要作用。惡性腫瘤具有從原發(fā)瘤分離及在體內(nèi)擴(kuò)散的能力，提示這些細(xì)胞在相互識(shí)別及黏附機(jī)制方面發(fā)生了改變。
血管形成實(shí)驗(yàn)
服務(wù)簡(jiǎn)介
在原有的毛細(xì)血管和(或)微靜脈基礎(chǔ)上通過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增殖，從已存在的血管處以芽生或非芽生(套迭)形式形成新的、以毛細(xì)血管為主的血管系統(tǒng)過(guò)程稱之為血管生成，通過(guò)體外模擬血管生成的過(guò)程對(duì)研究血管形成機(jī)制、發(fā)現(xiàn)促進(jìn)或抑制血管生成藥物十分重要。 |
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